光顕免疫組織化学において、試料作製過程での凍結技法の有用性は、よく知られています。その理由としては、分離細胞や切除組織の凍結融解処理での抗体等プローブの浸透性亢進を期待することがあげられます。一方では、組織の固定・脱水等に伴う人工産物形成をできるだけ避けるために、凍結技法を使用することも行われてきました。本コースにおいては、動物生体内可溶性蛋白分子局在を保存した組織標本を観察するために、液性寒剤を利用する凍結技法−凍結置換固定法を学んでもらいます。
・液性イソペンタン・プロパン混合寒剤(−193℃)の簡便な作製法、
・新鮮切除マウス肝・腎組織の浸漬凍結技法、
・麻酔下マウス各臓器の生体内凍結技法とクライオ生検法、
・凍結試料の２％パラフォルムアルデヒド・アセトン中での凍結置換固定法、
・凍結置換固定組織からの凍結切片作製と免疫染色法、
・共焦点レーザー顕微鏡での観察
をします。