アポトーシスに至るシグナル伝達過程において、カスパーゼファミリーは中心的な役割を担っている。ヒトでは現在までに12種類のカスパーゼの存在が知られているが、それぞれのカスパーゼの役割や細胞内局在に関しては不明な点が多い。カスパーゼ10は一連のカスパーゼ活性化カスケードの上流に位置し、強力なアポトーシス誘導能がある（図１）。カスパーゼ10のプロドメインは、それ自体はアポトーシス誘導能はないが、Death Effector Domainと呼ばれるモチーフを持ち、特殊な繊維状凝集塊をなすことが知られている。今回我々は、カスパーゼ10のプロドメインとGFPの融合蛋白を、ヒト細胞株である293細胞及びHeLa細胞内で一過性に発現させ、その細胞内局在を光顕、電顕的に観察した。

図１．アポトーシスへのシグナル伝達　　アポトーシスに至るシグナルは、Death受容体から直接カスパーゼの活性化に至る過程と、ミトコンドリアからのチトクロームcの放出を介してカスパーゼ活性化に至る過程とに大きく分けられる。カスパーゼ10は、前者の過程でカスパーゼ活性化カスケードの上流にあって重要な役割を演じている。（宮下 他、Organ Biology 7:53-60, 2000 より一部改変）

　カスパーゼ10のプロドメインをコードするcDNAを、Clontech社のGFPベクター（pEGFP-C2）に挿入し、融合蛋白発現ベクターを作製した。Qiagen社のEffectene reagentを用いて、このベクターをヒト胎児腎臓由来の263細胞と、ヒト子宮癌由来のHeLa細胞にトランスフェクションさせた。48時間培養後、共焦点レーザー顕微鏡にて観察した。一部は、4% ホルムアルデヒド固定（1時間）と0.1% Triton処理（5分間）後、抗GFPモノクローナル抗体（Clontech社、2時間）処理、HRP標識ウサギ抗マウスIgG（DAKO社、2時間）処理、DAB反応を経てEpon包埋し、透過電顕観察した。

　ヒト由来の263細胞やHeLa細胞に、カスパーゼ10プロドメインのGFP融合蛋白を発現させると、細胞質内とくに核周囲に繊維状に分布していた。また、抗GFP抗体を用いた包埋前染色法による電顕観察では、細胞質内に分布する繊維状あるいは層板状の構造や、ゴルジ領域に一致して陽性反応が認められた。HeLa細胞では核内にも繊維状の陽性反応を認めた。カスパーゼ10のプロドメインのみからなるこのような凝集塊の機能的意義については推測の域を出ないが、プロドメインはカスパーゼの細胞内局在を決めているという可能性もあり、ゴルジ領域にて仕分けされた後、核周囲に蓄積され、カスパーゼ系の調節に寄与しているものと考えられる。